肉的宰后嫩化其主要归因于肌原弹性纤维棉板构造的破环，肌原弹性纤维棉板构造是由内源性球蛋清酶电离体现酶可吸附肌原弹性纤维棉板和癌神经肿瘤细胞膜核骨架球蛋清酶带来的。与几百年来直是注重主焦点的钙球蛋清酶酶各不相同，胱天球蛋清酶酶（caspases）最近的成了熟悉爱好说说题。胱天球蛋清酶酶在癌神经肿瘤细胞膜核凋亡的施行阶段性起着至关关键的使用，这里面caspase-3在临死前球蛋清酶电离体现中的使用是各个面和冗杂的，但是应当进那步研发。S-亚硝基化经由调理钙脱离、体力分泌、球蛋清酶质可吸附和癌神经肿瘤细胞膜核凋亡来调理吃起来，属于嫩度和持水效果。早期研发遇到S-亚硝基化也可以变动依赖感线粒体的caspase-3级联体现，这应该是胸肌癌神经肿瘤细胞膜核凋亡和牛羊肉高质量变化规律的主观原因。caspase-3的研发关键性是其与癌神经肿瘤细胞膜核凋亡的有关，其实，少许有研发探究S-亚硝基化调理caspase-3的原则。

2024年9月由长沙农耕院校张万刚先生专业团体在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱动物为该研究提供了亚硝基化突显组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文名标题文字：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

期刊论文：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2021年关系指数公式：5.7

发稿时间间隔：2024年9月

顾客机关单位：南京农业大学

设计用料：蛋白

拜谱提供数据工艺：亚硝基化修饰组学

能力路径：

一、探析最终结果

01.Caspase-3活力

如今尚不了解清楚NO对caspase-3的克设计用能否归因于NO介导的S-亚硝基化，不同于含量系数的GSNO是外源性NO厂家直销，以诱导型caspase-3的身体外S-亚硝基化。但是是因为，与未GSNO的组差距，100、200和400μM GSNO组的caspase-3抗逆性相关性影响（图1），与此前简讯同一。GSNO工作影响caspase-3抗逆性的风险根本原因仍迫切需要展现。

图1 各种不同氨水浓度的GSNO治理对caspase-3生物的影响到

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化层次

宇宙探索Caspase-3的亚硝基化能力，以阐释GSNO对Caspase-3的影响性。经GSNO除理后，探测到caspase-3核蛋白S-亚硝基化效果加剧（图2）。这一些效果反映，外源性GSNO培养计划可完成诱导性caspase-3的离体S-亚硝基化。更让人难以相信的是，在不能GSNO存在着的比组中探测到一款 衰弱的S-亚硝基化带，这反映caspase-3机会会发生内源性的S-亚硝基化。还有就是，本宇宙探索中caspase-3的S-亚硝基化能力较高，而caspase-3的渗透性大大减少，这与之间的宇宙探索同样。而是，caspase-3的特情人S-亚硝基化表达位点尚不看清楚，还必须要 进一部的宇宙探索。

图2 GSNO进行处理对caspase-3S-亚硝基化技术的引响

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化淡化组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的编码回文序列。海蓝图标的编码回文序列表明S-亚硝基化肽，色图标的C表明S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱图

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3生物降解结蛋清

结蛋清看作其中一种首要的受损肿瘤细胞骨架蛋清，在确保肌受损肿瘤细胞机构的机构系统性和弯曲性各方面起着首要的功效，探究S-亚硝基化caspase-3对结蛋清可生物降解的敏锐性具备着首要价值。与Std（未用胱天蛋清酶-3和GSNO孵育的刚开始肌氯纶蛋清）组相对比，0 μM GSNO组（肌原氯纶和caspase-3的孵育，无GSNO）的系统结蛋清硫盐浓度可观较低，建议caspase-3对结蛋清具备着内在的的蛋清油脂水解专业能力。在GSNO孵育后，系统结蛋清的硫盐浓度非常明显增大（P < 0.05）。不但，当GSNO盐浓度上升时，系统结蛋清的硫盐浓度定期调涨（P < 0.05）（图5）。一项看到反映，SNO掩盖的caspase-3以关卡信任的形式治理和改善结蛋清的可生物降解。

图5.S-亚硝基化caspase-3溶解结核蛋白

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3挥发肌钙血清-T

肌钙蛋清质-T (TnT)是原肌球蛋清质调控责任人相关肌肉弯曲的丝条的须得肌原食物黏胶纤维素蛋清质。TnT的吸附特征英文是的检测工具到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化的条件下，caspase-3对TnT的吸附情形如图已知6一样，与Std组（不含有caspase-3和GSNO的肌原食物黏胶纤维素）比较，caspase-3组中30 kDa TnT细节描写为差异性新增，得出结论caspase-3组织了TnT的吸附，除此之外，caspase-3与GSNO的孵育诱发30 kDa TnT上升。在100和200 μM GSNO组中间不能的检测工具到看不出的差别(P > 0.05)，而当GSNO的溶液浓度达成400 μM 时，该细节描写为差异性极大减少(P < 0.05)。这个感觉得出结论了SNO淡化语的caspase-3对TnT吸附的克加工制的功效。结蛋清质和TnT是caspase-3的太敏感底物，而GSNO处里降底caspase-3的生物将会诱发肌原食物黏胶纤维素蛋清质吸附系数降底。上述讲到上述，NO引诱的S-亚硝基化不错借助淡化语半胱氨酸残基来调控caspase-3的生物，借以进一点干扰其对结蛋清质和TnT的蛋清质淀粉水解本事，进而干扰羊肉品级。

图6. S-亚硝基化caspase- 3生物降解肌钙蛋白酶-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、总结

本研发有赖于刍议S-亚硝基化对caspase-3体现的的应响基本己经对牛羊肉片肌原人造弹性纤维身体外光降解的的应响。球蛋白酶酶S-亚硝基化会体现caspase-3的半胱氨酸残基，若想使得caspase-3特异性缩减，进几步抑止了其对牛羊肉片肌原人造弹性纤维球蛋白酶酶的球蛋白酶酶蛋白质水解作用。

三、拜谱总结ppt

研究方案探讨分为了酶活判断，亚硝基化突显组学介绍，WB等判断伎俩，遇到核营养素酶质S-亚硝基化能突显caspase-3的半胱氨酸残基，这促使了caspase-3特异性的削减，并举1步监测了其对羊肉肌原人造纤维核营养素酶质的核营养素酶质淀粉水解力。本研究方案探讨为解说核营养素酶质质亚硝基化对肉嫩的监测制度给出好几个个新的第三视角。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的蛋清质组学、绘制蛋清质组学、消化吸收组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸品类新产品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺硝化作用、total空气氧化重现、自由巯基，欢迎大家咨询！

借鉴医学文献：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663